Javascript është aktualisht i çaktivizuar në shfletuesin tuaj.Kur javascript është i çaktivizuar, disa funksione të kësaj faqe interneti nuk do të funksionojnë.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Departamenti i Shkencës, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalonia, Spanjë * Këta autorë kanë disa njohuri të barabarta në këtë vepër Sfondi i kontributit: Acidi hialuronik (HA) është një polisaharid natyral i përdorur në prodhimin e mbushësve të lëkurës për qëllime estetike.Meqenëse ka një gjysmë jetë prej disa ditësh në indet e njeriut, mbushësit e lëkurës me bazë HA modifikohen kimikisht për të zgjatur jetën e tyre në trup.Modifikimi më i zakonshëm në mbushësit komercialë me bazë HA është përdorimi i 1,4-butanediol diglicidil eterit (BDDE) si një agjent ndërlidhës për të kryqëzuar zinxhirët HA.BDDE-ja e mbetur ose e pa reaguar konsiderohet jo toksike në <2 pjesë për milion (ppm);prandaj, BDDE-ja e mbetur në mbushësin përfundimtar të lëkurës duhet të matet për të garantuar sigurinë e pacientit.Materialet dhe metodat: Ky studim përshkruan zbulimin dhe karakterizimin e një nënprodukti të reaksionit të ndërlidhjes midis BDDE dhe HA në kushte alkaline duke kombinuar kromatografinë e lëngshme dhe spektrometrinë e masës (LC-MS).Rezultatet: Pas analizave të ndryshme, u zbulua se kushtet alkaline dhe temperatura e lartë e përdorur për dezinfektimin e hidrogelit HA-BDDE nxitën formimin e këtij nënprodukti të ri, përbërësit "propilen glikol".Analiza LC-MS konfirmoi se nënprodukti ka të njëjtën masë monoizotopike si BDDE, një kohë të ndryshme mbajtjeje (tR) dhe një mënyrë të ndryshme absorbimi UV (λ=200 nm).Ndryshe nga BDDE, në analizën LC-MS u vu re se në të njëjtat kushte matjeje, ky nënprodukt ka një shkallë më të lartë zbulimi në 200 nm.Përfundim: Këto rezultate tregojnë se nuk ka epooksid në strukturën e këtij përbërësi të ri.Diskutimi është i hapur për të vlerësuar rrezikun e këtij nënprodukti të ri që gjendet në prodhimin e hidrogelit HA-BDDE (mbushës dermal HA) për qëllime komerciale.Fjalë kyçe: acid hialuronik, mbushës dermal HA, acid hialuronik i ndërlidhur, BDDE, analiza LC-MS, nënprodukt BDDE.
Mbushësit e bazuar në acidin hialuronik (HA) janë mbushësit më të zakonshëm dhe më të njohur të lëkurës që përdoren për qëllime kozmetike.1 Ky mbushës dermal është një hidrogel, zakonisht i përbërë nga >95% ujë dhe 0.5-3% HA, i cili u jep atyre një strukturë të ngjashme me xhel.2 HA është një polisaharid dhe përbërësi kryesor i matricës jashtëqelizore të vertebrorëve.Një nga përbërësit.Ai përbëhet nga (1,4)-acid glukuronik-β (1,3)-N-acetilglukozamine (GlcNAc) njësi disakaride përsëritëse të lidhura me lidhje glikozidike.Ky model disakaridësh është i njëjtë në të gjithë organizmat.Krahasuar me disa mbushës me bazë proteinash (si kolagjeni), kjo veti e bën HA një molekulë shumë biokompatibile.Këta mbushës mund të shfaqin specifikë të sekuencës së aminoacideve që mund të njihet nga sistemi imunitar i pacientit.
Kur përdoret si mbushës i lëkurës, kufizimi kryesor i HA është qarkullimi i shpejtë i tij brenda indeve për shkak të pranisë së një familjeje specifike enzimash të quajtura hialuronidaza.Deri më tani, janë përshkruar disa modifikime kimike në strukturën e HA për të rritur gjysmën e jetës së HA në inde.3 Shumica e këtyre modifikimeve përpiqen të zvogëlojnë aksesin e hialuronidazës në polimeret polisaharide duke ndërlidhur zinxhirët HA.Prandaj, për shkak të formimit të urave dhe lidhjeve kovalente ndërmolekulare midis strukturës HA dhe agjentit ndërlidhës, hidrogeli HA i ndërlidhur prodhon më shumë produkte të degradimit kundër enzimës sesa HA natyrale.4-6
Deri më tani, agjentët kimikë ndërlidhës të përdorur për të prodhuar HA të kryqëzuar përfshijnë metakrilamid, 7 hidrazid, 8 karbodiimid, 9 divinil sulfon, 1,4-butanediol diglicidil eter (BDDE) dhe poli(etilen glikol) diglicidil eter.10,11 BDDE është aktualisht agjenti ndërlidhës më i përdorur.Edhe pse këto lloje të hidrogeleve janë vërtetuar të jenë të sigurt për dekada, agjentët ndërlidhës të përdorur janë reagjentë reaktivë që mund të jenë citotoksikë dhe, në disa raste, mutagjenë.12 Prandaj, përmbajtja e tyre e mbetur në hidrogelin përfundimtar duhet të jetë e lartë.BDDE konsiderohet e sigurt kur përqendrimi i mbetur është më pak se 2 pjesë për milion (ppm).4
Ka disa metoda për të zbuluar përqendrimin e mbetjeve të ulët të BDDE, shkallën e ndërlidhjes dhe pozicionin e zëvendësimit në hidrogelet HA, të tilla si kromatografia me gaz, kromatografia me përjashtim të madhësisë së bashku me spektrometrinë e masës (MS), metodat e matjes së fluoreshencës së rezonancës magnetike bërthamore (NMR) dhe Kromatografia e lëngshme me performancë të lartë e kombinuar me grup diodë (HPLC).13-17 Ky studim përshkruan zbulimin dhe karakterizimin e një nënprodukti në hidrogelin përfundimtar HA të ndërlidhur të prodhuar nga reaksioni i BDDE dhe HA në kushte alkaline.HPLC dhe kromatografi e lëngshme-spektrometria e masës (analiza LC-MS).Meqenëse toksiciteti i këtij nënprodukti të BDDE është i panjohur, ne rekomandojmë që sasia e mbetjeve të tij të përcaktohet në mënyrë të ngjashme me metodën që zakonisht kryhet në BDDE në produktin përfundimtar.
Kripa e natriumit e përftuar e HA (Shiseido Co., Ltd., Tokio, Japoni) ka një peshë molekulare prej ~ 1.368.000 Da (metoda Laurent) 18 dhe një viskozitet të brendshëm prej 2.20 m3/kg.Për reaksionin e ndërlidhjes, BDDE (≥95%) u ble nga Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, SHBA).Fijet e kripura me pufer me fosfat me pH 7.4 u ble nga Sigma-Aldrich Company.Të gjithë tretësit, acetonitrili dhe uji i përdorur në analizën LC-MS janë blerë nga cilësia e klasës HPLC.Acidi formik (98%) blihet si kategori reagenti.
Të gjitha eksperimentet u kryen në një sistem UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, USA) dhe u lidhën me një spektrometër masiv katërpolësh trepolësh API 3000 të pajisur me një burim jonizimi me elektrospërkatje (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Sinteza e hidrogeleve HA të ndërlidhura filloi duke shtuar 198 mg BDDE në një zgjidhje 10% (w/w) hialuronat natriumi (NaHA) në prani të 1% alkalit (hidroksid natriumi, NaOH).Përqendrimi përfundimtar i BDDE në përzierjen e reaksionit ishte 9,9 mg/mL (0,049 mM).Më pas, përzierja e reaksionit përzihet tërësisht dhe homogjenizohet dhe lihet të vazhdojë në 45°C për 4 orë.19 PH i reaksionit mbahet në ~12.
Më pas, përzierja e reaksionit u la me ujë dhe hidrogeli përfundimtar HA-BDDE u filtua dhe u hollua me tampon PBS për të arritur një përqendrim HA prej 10 deri në 25 mg/mL dhe një pH përfundimtar prej 7.4.Për të sterilizuar hidrogelet e prodhuara me lidhje të kryqëzuara HA, të gjitha këto hidrogele autoklavohen (120°C për 20 minuta).Hidrogeli i pastruar BDDE-HA ruhet në 4°C deri në analizë.
Për të analizuar BDDE-në e pranishme në produktin HA të ndërlidhur, një kampion 240 mg u peshua dhe u fut në vrimën qendrore (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; vëllimi 0.5 mL) dhe u centrifugua në 10,000 rpm në temperaturën e dhomës. 10 minuta.U mblodhën dhe u analizuan gjithsej 20 µL lëngu tërheqës.
Për të analizuar standardin BDDE (Sigma-Aldrich Co) në kushte alkaline (1%, 0.1% dhe 0.01% NaOH), nëse plotësohen kushtet e mëposhtme, mostra e lëngshme është 1:10, 1:100 ose deri në 1:1,000,000 Nëse është e nevojshme, përdorni ujë të dejonizuar MilliQ për analiza.
Për materialet fillestare të përdorura në reaksionin e ndërlidhjes (HA 2%, H2O, 1% NaOH dhe 0.049 mM BDDE), 1 mL e çdo kampioni të përgatitur nga këto materiale u analizua duke përdorur të njëjtat kushte analize.
Për të përcaktuar specifikën e majave që shfaqen në hartën e joneve, 10 µL tretësirë standarde BDDE 100 ppb (Sigma-Aldrich Co) iu shtuan kampionit 20 µL.Në këtë rast, përqendrimi përfundimtar i standardit në çdo mostër është 37 ppb.
Së pari, përgatisni një tretësirë stok BDDE me një përqendrim 11,000 mg/L (11,000 ppm) duke holluar 10 μL BDDE standarde (Sigma-Aldrich Co) me 990 μL ujë MilliQ (densiteti 1,1 g/mL).Përdoreni këtë tretësirë për të përgatitur një tretësirë BDDE 110 µg/L (110 ppb) si një hollim standard i ndërmjetëm.Më pas, përdorni holluesin standard të ndërmjetëm BDDE (110 ppb) për të përgatitur kurbën standarde duke holluar holluesin e ndërmjetëm disa herë për të arritur përqendrimin e dëshiruar prej 75, 50, 25, 10 dhe 1 ppb.Siç tregohet në figurën 1, është gjetur se kurba standarde BDDE nga 1.1 në 110 ppb ka linearitet të mirë (R2>0.99).Kurba standarde u përsërit në katër eksperimente të pavarura.
Figura 1 Kurba standarde e kalibrimit BDDE e marrë nga analiza LC-MS, në të cilën vërehet një korrelacion i mirë (R2>0.99).
Shkurtesat: BDDE, 1,4-butanediol diglicidil eter;LC-MS, kromatografia e lëngët dhe spektrometria e masës.
Për të identifikuar dhe vlerësuar standardet BDDE të pranishme në HA të ndërlidhur dhe standardet BDDE në tretësirën bazë, u përdor analiza LC-MS.
Ndarja kromatografike u arrit në një kolonë LUNA 2,5 µm C18(2)-HST (50×2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) dhe u mbajt në temperaturën e dhomës (25°C) gjatë analizës.Faza e lëvizshme përbëhet nga acetonitrili (tretësi A) dhe uji (tretësi B) që përmban 0,1% acid formik.Faza e lëvizshme elurohet nga elucioni i gradientit.Gradienti është si më poshtë: 0 minuta, 2% A;1 minutë, 2% A;6 minuta, 98% A;7 minuta, 98% A;7.1 minuta, 2% A;10 minuta, 2% A. Koha e funksionimit është 10 minuta dhe vëllimi i injektimit është 20 µL.Koha e mbajtjes së BDDE është rreth 3.48 minuta (duke variuar nga 3.43 në 4.14 minuta në bazë të eksperimenteve).Faza e lëvizshme u pompua me një shpejtësi rrjedhëse prej 0.25 mL/min për analizën LC-MS.
Për analizën BDDE dhe përcaktimin sasior nga MS, sistemi UPLC (Ujërat) kombinohet me një spektrometër masiv katërpolësh trepolësh API 3000 (AB SCIEX) i pajisur me një burim jonizimi me elektrospërkatje dhe analiza kryhet në modalitetin e joneve pozitive (ESI+).
Sipas analizës së fragmentit të joneve të kryer në BDDE, fragmenti me intensitetin më të lartë u përcaktua se ishte fragmenti që korrespondon me 129,1 Da (Figura 6).Prandaj, në modalitetin e monitorimit me shumë jon (MIM) për përcaktimin e sasisë, konvertimi i masës (raporti masë-ngarkesa [m/z]) i BDDE është 203.3/129.1 Da.Përdor gjithashtu modalitetin e skanimit të plotë (FS) dhe mënyrën e skanimit të joneve të produktit (PIS) për analizën LC-MS.
Për të verifikuar specifikën e metodës, u analizua një kampion bosh (faza fillestare e lëvizshme).Asnjë sinjal nuk u zbulua në kampionin bosh me një konvertim masiv prej 203.3/129.1 Da.Për sa i përket përsëritshmërisë së eksperimentit, u analizuan 10 injeksione standarde prej 55 ppb (në mes të kurbës së kalibrimit), duke rezultuar në një devijim standard të mbetur (RSD) <5% (të dhënat nuk tregohen).
Përmbajtja e mbetur e BDDE u përcaktua në tetë hidrogela të ndryshëm HA të autoklavuar të ndërlidhur me BDDE, që korrespondojnë me katër eksperimente të pavarura.Siç përshkruhet në seksionin "Materiale dhe Metoda", sasia vlerësohet nga vlera mesatare e kurbës së regresionit të hollimit standard BDDE, e cila korrespondon me pikun unik të zbuluar në tranzicionin masiv të BDDE prej 203.3/129.1 Da, me një mbajtje koha prej 3.43 deri në 4.14 minuta Pa pritur.Figura 2 tregon një shembull kromatogrami të standardit të referencës BDDE 10 ppb.Tabela 1 përmbledh përmbajtjen e mbetur të BDDE të tetë hidrogeleve të ndryshme.Gama e vlerave është nga 1 deri në 2,46 ppb.Prandaj, përqendrimi i mbetur i BDDE në kampion është i pranueshëm për përdorim njerëzor (<2 ppm).
Figura 2 Kromatogrami jonik i standardit referencë BDDE 10 ppb (Sigma-Aldrich Co), tranzicioni MS (m/z) i marrë nga analiza LC-MS prej 203.30/129.10 Da (në modalitetin MRM pozitiv).
Shkurtesat: BDDE, 1,4-butanediol diglicidil eter;LC-MS, kromatografi e lëngët dhe spektrometri e masës;MRM, monitorim i shumë reagimeve;MS, masë;m/z, raporti masë ndaj karikimit.
Shënim: Mostrat 1-8 janë hidrogela HA të autoklavuara të lidhura me BDDE.Raportohet gjithashtu sasia e mbetur e BDDE në hidrogel dhe kulmi i kohës së mbajtjes së BDDE.Së fundi, raportohet edhe ekzistenca e majave të reja me kohë të ndryshme mbajtjeje.
Shkurtesat: BDDE, 1,4-butanediol diglicidil eter;HA, acid hialuronik;MRM, monitorim i shumë reagimeve;tR, koha e mbajtjes;LC-MS, kromatografi e lëngët dhe spektrometri e masës;RRT, koha relative e mbajtjes.
Çuditërisht, analiza e kromatogramit jonik LC-MS tregoi se bazuar në të gjitha mostrat e analizuara të hidrogelit HA të ndërlidhura të autoklavuara, kishte një kulm shtesë në kohën më të shkurtër të mbajtjes prej 2.73 deri në 3.29 minuta.Për shembull, Figura 3 tregon kromatogramin jonik të një kampioni HA të ndërlidhur, ku një kulm shtesë shfaqet në një kohë të ndryshme mbajtjeje prej afërsisht 2.71 minutash.Koha e mbajtjes relative e vëzhguar (RRT) midis pikut të sapo vëzhguar dhe pikut nga BDDE u gjet të ishte 0.79 (Tabela 1).Meqenëse e dimë se kulmi i sapo vëzhguar ruhet më pak në kolonën C18 të përdorur në analizën LC-MS, kulmi i ri mund të korrespondojë me një përbërje më polar se BDDE.
Figura 3 Kromatogrami jonik i kampionit të hidrogelit HA të ndërlidhur i marrë nga LC-MS (konvertimi i masës MRM 203.3/129.0 Da).
Shkurtesat: HA, acid hialuronik;LC-MS, kromatografi e lëngët dhe spektrometri e masës;MRM, monitorim i shumë reagimeve;RRT, koha relative e mbajtjes;tR, koha e mbajtjes.
Për të përjashtuar mundësinë që majat e reja të vëzhguara mund të jenë ndotës të pranishëm fillimisht në lëndët e para të përdorura, këto lëndë të para u analizuan gjithashtu duke përdorur të njëjtën metodë analize LC-MS.Materialet fillestare të analizuara përfshijnë ujë, 2% NaHA në ujë, 1% NaOH në ujë dhe BDDE në të njëjtin përqendrim të përdorur në reaksionin e ndërlidhjes.Kromatogrami jonik i materialit fillestar të përdorur nuk tregoi ndonjë përbërje ose kulm dhe koha e mbajtjes së tij korrespondon me pikun e ri të vëzhguar.Ky fakt hedh poshtë idenë se jo vetëm materiali fillestar mund të përmbajë ndonjë përbërje ose substancë që mund të ndërhyjë në procedurën e analizës, por nuk ka asnjë shenjë të mundshme të ndërthurjes me produkte të tjera laboratorike.Vlerat e përqendrimit të marra pas analizës LC-MS të BDDE dhe majave të reja tregohen në Tabelën 2 (mostrat 1-4) dhe kromatogramin jonik në Figurën 4.
Shënim: Mostrat 1-4 korrespondojnë me lëndët e para të përdorura për prodhimin e hidrogeleve HA të autoklavuara me lidhje të kryqëzuara BDDE.Këto mostra nuk u autoklavuan.
Shkurtesat: BDDE, 1,4-butanediol diglicidil eter;HA, acid hialuronik;LC-MS, kromatografi e lëngët dhe spektrometri e masës;MRM, monitorim i shumë reagimeve.
Figura 4 korrespondon me kromatogramin LC-MS të një kampioni të lëndës së parë të përdorur në reaksionin e ndërlidhjes së HA dhe BDDE.
Shënim: Të gjitha këto maten në të njëjtin përqendrim dhe raport të përdorur për të kryer reaksionin e ndërlidhjes.Numrat për lëndët e para të analizuara nga kromatogrami korrespondojnë me: (1) ujë, (2) tretësirë ujore HA 2%, (3) tretësirë ujore 1% NaOH.Analiza LC-MS kryhet për konvertimin masiv të 203.30/129.10 Da (në modalitetin MRM pozitiv).
Shkurtesat: BDDE, 1,4-butanediol diglicidil eter;HA, acid hialuronik;LC-MS, kromatografi e lëngët dhe spektrometri e masës;MRM, monitorim i shumë reagimeve.
U studiuan kushtet që çuan në formimin e majave të reja.Për të studiuar se si kushtet e reaksionit të përdorura për prodhimin e hidrogelit HA të ndërlidhur ndikojnë në reaktivitetin e agjentit ndërlidhës BDDE, duke çuar në formimin e majave të reja (nënprodukte të mundshme), u kryen matje të ndryshme.Në këto përcaktime, ne studiuam dhe analizuam ndërlidhësin përfundimtar BDDE, i cili u trajtua me përqendrime të ndryshme të NaOH (0%, 1%, 0.1% dhe 0.01%) në një mjedis ujor, i ndjekur nga ose pa autoklavim.Procedura e baktereve për të simuluar të njëjtat kushte është e njëjtë me metodën e përdorur për prodhimin e hidrogelit HA të ndërlidhur.Siç përshkruhet në seksionin "Materiale dhe Metoda", kalimi masiv i kampionit u analizua me LC-MS në 203.30/129.10 Da.BDDE dhe përqendrimi i pikut të ri janë llogaritur dhe rezultatet janë paraqitur në tabelën 3. Nuk u zbuluan maja të reja në mostrat që nuk u autoklavuan, pavarësisht nga prania e NaOH në tretësirë (mostrat 1-4, Tabela 3).Për mostrat e autoklavuara, pikat e reja zbulohen vetëm në prani të NaOH në tretësirë dhe formimi i pikut duket se varet nga përqendrimi i NaOH në tretësirë (mostrat 5-8, Tabela 3) (RTT = 0,79).Figura 5 tregon një shembull të një kromatogrami jonik, që tregon dy mostra të autoklavuara në prani ose mungesë të NAOH.
Shkurtesat: BDDE, 1,4-butanediol diglicidil eter;LC-MS, kromatografi e lëngët dhe spektrometri e masës;MRM, monitorim i shumë reagimeve.
Shënim: Kromatogrami i sipërm: Mostra u trajtua me tretësirë ujore 0.1% NaOH dhe u autoklavua (120°C për 20 minuta).Kromatogrami i poshtëm: Mostra nuk u trajtua me NaOH, por u autoklavua në të njëjtat kushte.Konvertimi masiv i 203.30/129.10 Da (në modalitetin MRM pozitiv) u analizua nga LC-MS.
Shkurtesat: BDDE, 1,4-butanediol diglicidil eter;LC-MS, kromatografi e lëngët dhe spektrometri e masës;MRM, monitorim i shumë reagimeve.
Në të gjitha mostrat e autoklavuara, me ose pa NaOH, përqendrimi i BDDE u reduktua shumë (deri në 16.6 herë) (mostrat 5-8, Tabela 2).Ulja e përqendrimit të BDDE mund të jetë për shkak të faktit se në temperatura të larta, uji mund të veprojë si bazë (nukleofile) për të hapur unazën epookside të BDDE për të formuar një përbërje 1,2-diol.Cilësia monoizotopike e këtij përbërësi është e ndryshme nga ajo e BDDE dhe për këtë arsye nuk do të ndikohet.LC-MS zbuloi një zhvendosje masive prej 203.30/129.10 Da.
Së fundi, këto eksperimente tregojnë se gjenerimi i majave të reja varet nga prania e BDDE, NAOH dhe procesi i autoklavimit, por nuk ka asnjë lidhje me HA.
Pika e re e gjetur në një kohë mbajtjeje prej afërsisht 2.71 minuta u karakterizua më pas nga LC-MS.Për këtë qëllim, BDDE (9.9 mg/mL) u inkubua në një tretësirë ujore 1% NaOH dhe u autoklavua.Në tabelën 4, karakteristikat e pikut të ri krahasohen me pikun e njohur të referencës BDDE (koha e mbajtjes afërsisht 3,47 minuta).Bazuar në analizën e fragmentimit të joneve të dy majave, mund të konkludohet se piku me kohë mbajtjeje 2.72 minuta tregon të njëjtat fragmente si piku BDDE, por me intensitet të ndryshëm (Figura 6).Për pikun që korrespondon me kohën e mbajtjes (PIS) prej 2.72 minutash, një kulm më intensiv u vu re pas fragmentimit në një masë prej 147 Da.Në përqendrimin e BDDE (9.9 mg/mL) të përdorur në këtë përcaktim, u vërejtën edhe mënyra të ndryshme absorbimi (UV, λ=200 nm) në spektrin ultravjollcë pas ndarjes kromatografike (Figura 7).Piku me kohë mbajtjeje 2.71 minuta është ende i dukshëm në 200 nm, ndërsa kulmi BDDE nuk mund të vërehet në kromatogram në të njëjtat kushte.
Tabela 4 Rezultatet e karakterizimit të pikut të ri me një kohë mbajtjeje prej rreth 2,71 minuta dhe pikut BDDE me një kohë mbajtjeje prej 3,47 minutash
Shënim: Për të marrë këto rezultate, analizat LC-MS dhe HPLC (MRM dhe PIS) u kryen në dy majat.Për analizën HPLC, përdoret zbulimi UV me një gjatësi vale prej 200 nm.
Shkurtesat: BDDE, 1,4-butanediol diglicidil eter;HPLC, kromatografi e lëngshme me performancë të lartë;LC-MS, kromatografi e lëngët dhe spektrometri e masës;MRM, monitorim i shumë reagimeve;m/z, raporti masë ndaj ngarkimit;PIS, produkt Skanim jonesh;dritë ultravjollcë, dritë ultravjollcë.
Shënim: Fragmentet në masë janë marrë me analizë LC-MS (PIS).Kromatogrami i sipërm: spektri masiv i fragmenteve të mostrës standarde BDDE.Kromatogrami i poshtëm: Spektri masiv i pikut të ri të zbuluar (RTT i lidhur me pikun BDDE është 0.79).BDDE u përpunua në tretësirë 1% NaOH dhe u autoklavua.
Shkurtesat: BDDE, 1,4-butanediol diglicidil eter;LC-MS, kromatografi e lëngët dhe spektrometri e masës;MRM, monitorim i shumë reagimeve;PIS, skanim i joneve të produktit;RRT, koha relative e mbajtjes.
Figura 7 Kromatogrami jonik i jonit pararendës 203,30 Da, dhe (A) piku i ri me një kohë mbajtjeje prej 2,71 minuta dhe (B) zbulimi UV i pikut standard të referencës BDDE në 3,46 minuta në 200 nm.
Në të gjitha hidrogelet HA me lidhje të kryqëzuara të prodhuara, u vu re se përqendrimi i mbetur i BDDE pas përcaktimit të sasisë LC-MS ishte <2 ppm, por në analizë u shfaq një kulm i ri i panjohur.Ky kulm i ri nuk përputhet me produktin standard BDDE.Produkti standard BDDE i është nënshtruar gjithashtu të njëjtës analizë të konvertimit të cilësisë (konvertimi MRM 203.30/129.10 Da) në modalitetin MRM pozitiv.Në përgjithësi, metoda të tjera analitike si kromatografia përdoren si teste kufitare për të zbuluar BDDE në hidrogele, por kufiri maksimal i zbulimit (LOD) është pak më i ulët se 2 ppm.Nga ana tjetër, deri më tani, NMR dhe MS janë përdorur për të karakterizuar shkallën e ndërlidhjes dhe/ose modifikimit të HA në fragmentet e njësive të sheqerit të produkteve HA me lidhje të kryqëzuara.Qëllimi i këtyre teknikave nuk ka qenë kurrë të përcaktojë sasinë e zbulimit të mbetur të BDDE në përqendrime kaq të ulëta siç përshkruajmë në këtë artikull (LOD i metodës sonë LC-MS = 10 ppb).
Koha e postimit: Shtator-01-2021